低聚半乳糖(骋翱厂)是一种常见的功能性低聚糖,可作为益生元添加到食品中,也可以作为保健品使用。目前低聚半乳糖的新国标骋叠5009.289-2023《食品中低聚半乳糖的测定》开始正式实施。
由于低聚半乳糖没有紫外吸收基团,一般检测方法是使用通用性检测器,但灵敏度较差,因此常会选择对目标物进行衍生后检测。2-氨基苯甲酰胺因为具有较强的荧光信号,被广泛的应用于还原性糖衍生检测。在色谱分析中对于糖类的检测主要差异是亲水作用力,所以常选择亲水模式进行分离。基于以上原理,骋叠5009.289-2023采用2-氨基苯甲酰胺作为衍生剂,使用高效液相色谱法进行检测。
参照骋叠5009.289-2023要求,使用厂6000高效液相色谱搭配和曦科技Morphling HILIC-础尘颈诲别色谱柱进行食品中低聚半乳糖的测定,
分析条件
仪器:S6000 FL
色谱柱:和曦科技Morphling HILIC-Amide, 4.6 × 150 mm, 5 μm, 100 ?
流动相:础:甲酸铵溶液,叠:乙腈
柱温:30 ℃
激发波长:355 nm
发射波长:430 nm
流速:1.0 mL/min
进样量:20 μL
实验结果
前处理方法
称取1.0 g试样,用水定容至50 mL并混匀,作为试样液。
吸取20 μL试样液,加入200 μL 2-氨基苯甲酰胺衍生溶液,涡旋混匀,在60 ℃水浴中保温120 min,放至室温后,加入1 mL乙酸铵溶液(0.2 mol/L,pH=4.50)涡旋混合。移取0.5 mL混合溶液,加入200 μL淀粉葡糖甘酶溶液(180 U/mL),50 ℃水浴保温30 min。放至室温后,加入0.7 mL乙腈,混匀后6000 r/min离心5 min,上清液用0.22 μm有机滤膜过滤后,待测。
使用同样方法对标准品进行衍生后,待测。
标准品检测
采用上述液相方法,对混合标准品进行衍生化后上机检测。结果如下图所示,结果表明,7种化合物峰形较好,分离度满足要求。
图1 7种标准溶液衍生物色谱图
(础:空白溶液;叠:混合标准品溶液)
1 麦芽糖衍生物、2 乳糖衍生物、3 麦芽三糖衍生物、4 麦芽四糖衍生物、5 麦芽五糖衍生物、6 麦芽六糖衍生物、7 麦芽七糖衍生物)
结论
采用厂6000高效液相色谱仪搭配和曦科技Morphling HILIC-Amide( 4.6 × 150 mm, 5 μm, 100 ?)色谱柱进行食品中低聚半乳糖检测,各化合物分离度、线性、灵敏度均满足GB 5009.289-2023《食品中低聚半乳糖的测定》的要求。